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　　人胰高血糖素样肽1(GLP-1)ELISA试剂盒使用说明书

　　BS-0203-A  人胰高血糖素样肽1(GLP-1)ELISA 试剂盒  96T

　　BS-0203-B  人胰高血糖素样肽1(GLP-1)ELISA 试剂盒  48T

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法检测人血清、血浆或细胞培养上清中的GLP-1水平。其核心步骤包括：

　　固相抗体包被?：微孔板预包纯化抗GLP-1单克隆抗体。

　　抗原-抗体结合?：样本中GLP-1与固相抗体结合，再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗形成复合物。

　　显色反应?：加入底物TMB显色，酸终止后于450nm波长测定吸光度，浓度与显色深度成正比?。

　　二、试剂盒组成

　　组分 规格 备注

　　预包被微孔板 12孔×8条 含抗GLP-1抗体

　　标准品 0.5ml/瓶 冻干粉，需复溶

　　HRP标记二抗 6ml 避光保存

　　显色底物(TMB) A液6ml+B液6ml 现用现配

　　终止液 6ml 2M硫酸

　　浓缩洗涤液 20ml 需1:20稀释

　　样本xishi液 6ml 含稳定剂

　　注?：不同品牌组分可能存在差异，详见具体说明书。

　　三、样本处理

　　1. 样本类型

　　血清/血浆?：EDTA或肝素抗凝，离心取上清。

　　细胞上清?：1000×g离心20分钟去除杂质。

　　组织匀浆?：裂解后离心取上清。

　　2. 保存条件

　　短期?：2-8℃保存≤48小时。

　　长期?：分装后-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。

　　3. 稀释建议

　　常规样本?：推荐稀释5-20倍(如取20μL样本+180μL稀释液)。

　　高浓度样本?：需预实验确定稀释倍数，最高稀释100000倍(三步稀释法)。

　　四、操作步骤

　　标准品配制?

　　冻干标准品加1mL稀释液复溶，混匀后静置10分钟。

　　进行系列稀释(如8pmol/L→4pmol/L→…→0.5pmol/L)。

　　加样?

　　标准孔：50μL/孔。

　　样本孔：先加40μL稀释液，再加10μL样本(总稀释5倍)。

　　空白孔：不加样本及二抗。

　　孵育?

　　37℃孵育120分钟，洗板3次(每次浸泡1分钟)。

　　显色与终止?

　　每孔加TMB显色液100μL，37℃避光孵育15分钟。

　　加终止液50μL终止反应，30分钟内测OD值。

　　五、注意事项

　　样本避免?：溶血、高脂样本及含NaN3的样本(抑制HRP活性)。

　　试剂平衡?：使用前室温平衡20分钟，浓缩洗涤液需40℃水浴溶解结晶。

　　质量控制?：建议设置复孔，标准曲线R2应≥0.95。

　　六、结果分析

　　标准曲线?：以OD值对浓度绘制四参数方程。

　　浓度计算?：样本OD值代入曲线方程，再乘以稀释倍数。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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