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人白介素6(IL-6)ELISA检测试剂盒说明书
BS-0049 人白介素6(IL-6)ELISA检测试剂盒
1. 目的?
本试剂盒用于定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液及组织匀浆样本中白介素6(IL-6)的浓度。本检测为科研提供数据，供参考。
2. 实验原理?
采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)：
捕获抗体?：抗人IL-6单抗预包被于微孔板，形成固相抗体层。
抗原结合?：样本中IL-6与捕获抗体结合，再加入生物素化检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体"复合物。
显色反应?：加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素，催化底物TMB显色(蓝色→黄色)，颜色深浅与IL-6浓度正相关，450nm波长下测定吸光度(OD值)。
3. 试剂盒组成?
酶标板?：96孔/48孔预包被抗IL-6抗体。
标准品?：6个梯度浓度(0、3、6、12、24、48 pg/mL)，冻干粉保存。
检测抗体?：生物素化抗IL-6抗体，2-8℃避光保存。
酶结合物?：HRP标记链霉亲和素，避光保存。
底物液?：TMB显色液，避光保存。
终止液?：2M硫酸，终止显色反应。
洗涤液?：20×浓缩液，需稀释使用。
样本稀释液?：10×浓缩液，用于样本预处理。
封板膜?：密封酶标板，防止蒸发。
说明书?：详细操作流程及注意事项。
4. 样本处理?
血清/血浆?：室温凝固10-20分钟，离心(2000-3000转/分，20分钟)收集上清，避免溶血。
细胞上清?：离心去除细胞碎片，检测分泌性IL-6。
组织匀浆?：PBS稀释至细胞浓度约100万/mL，反复冻融释放细胞内成分，离心取上清。
保存?：2-8℃短期(≤48小时)或-20℃/-70℃长期保存，避免反复冻融。
禁忌?：避免含NaN3样本，因NaN3抑制HRP活性。
5. 操作步骤?
标准品稀释?：冻干标准品用蒸馏水复溶，梯度稀释至0-48 pg/mL。
加样?：
标准品孔：各加50μL不同浓度标准品。
样本孔：加40μL样本稀释液+10μL样本(5倍稀释)。
空白孔：不加样本及酶标试剂。
温育?：37℃孵育60分钟，封板膜密封。
洗涤?：甩干孔内液体，用洗涤液浸泡10-30秒，重复3-5次。
加酶标试剂?：每孔加100μL HRP标记抗体，37℃孵育30分钟。
显色?：加100μL TMB底物，避光显色15分钟。
终止?：加100μL终止液，蓝色变黄色，30分钟内测OD值。
6. 结果计算?
标准曲线?：以标准品浓度(pg/mL)为横坐标，OD值为纵坐标，绘制曲线。
样本浓度?：根据样本OD值在标准曲线上查得IL-6含量，乘以稀释倍数。
注意事项?：
预实验确定样本稀释倍数，确保OD值在标准曲线范围内。
避免气泡产生，轻柔混匀标准品。
显色底物避光保存，终止液顺序与显色一致。
7. 性能指标?
灵敏度?：低检测浓度<0.1 pg/mL。
特异性?：仅识别人IL-6，不与其他细胞因子交叉反应。
重复性?：板内、板间变异系数<10%。
8. 注意事项?
试剂保存?：2-8℃避光，有效期6个月，勿使用过期试剂。
操作规范?：
避免接触微孔板内壁，防止污染。
洗板时充分浸泡，提高洗涤效果。
显色反应避光，终止液充分混匀。
样本限制?：不可检测NaN3样本。
9. 储存条件?
未开封试剂盒：2-8℃保存。
开封后：按组分说明分装保存，避免反复冻融。
注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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