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人谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)ELISA检测试剂盒技术说明书
BS-9843 人谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)ELISA试剂盒
产品概述
本试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)?,用于体外定量检测人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液及细胞培养上清等样本中的谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)浓度。GPX4是谷胱甘肽过氧化物酶家族的关键成员,通过催化还原型谷胱甘肽(GSH)清除脂质过氧化物,在抑制铁死亡、维持细胞膜完整性及抗氧化应激中发挥核心作用?。
检测原理
双抗体夹心法?:包被抗体与样本中GPX4结合,生物素标记抗体形成复合物,辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素催化显色反应,显色强度与样本中GPX4浓度成正比?。
特异性?:可特异性识别GPX4,与类似物无交叉反应,确保检测准确性?。
试剂盒组成
组分 规格/描述
预包被微孔板 96孔板,含抗人GPX4抗体
标准品 冻干粉,重组人GPX4蛋白,临用前用稀释液复溶
生物素标记抗体 液体,HRP标记抗人GPX4抗体
显色底物(TMB) 液体,3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液
终止液 2M硫酸溶液
洗涤缓冲液 20×浓缩液,含吐温-20
样本稀释液 缓冲液,用于稀释高浓度样本
封板膜 透明,用于微孔板密封
样本处理与保存
样本类型?:血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等?。
处理方法?:
血清/血浆:室温凝固后离心(3000 rpm,10分钟),取上清。
组织匀浆:用生理盐水制备10%匀浆液,离心取上清。
细胞裂解液:裂解后离心(15000 rpm,10分钟),取上清。
保存条件?:短期(≤7天)2-8℃保存,长期(>7天)需分装-20℃冻存,避免反复冻融?。
操作步骤
标准品稀释?:用样本稀释液将标准品依次稀释为1000 pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL,0 pg/mL为空白对照?。
加样?:每孔加入100 μL标准品或样本,37℃孵育90分钟。
洗涤?:弃去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复5次,拍干。
加生物素标记抗体?:每孔加入100 μL生物素标记抗体,37℃孵育60分钟。
加显色底物?:每孔加入90 μL TMB底物,37℃避光孵育15-30分钟。
终止反应?:每孔加入50 μL终止液,混匀后立即测定吸光度。
结果计算
仪器设置?:酶标仪波长450 nm(参考波长630 nm)。
数据处理?:以标准品浓度(pg/mL)为横坐标,OD值为纵坐标,绘制标准曲线。样本浓度通过曲线方程计算,乘以稀释倍数?。
灵敏度?:7.69 pg/mL,检测范围15.62-1000 pg/mL?。
注意事项
交叉反应?:不与GPX1、GPX2、GPX3等类似物发生交叉反应?。
操作规范?:
洗涤需干净,避免残留液体影响结果。
显色时间控制在15-30分钟,避免过度显色导致数据偏差。
样本避免反复冻融,以防蛋白降解。
质量控制?:建议每批次实验设置双孔复测,CV值<10%为合格?。
储存条件
未开封试剂盒:2-8℃避光保存,有效期6个月。
开封后:标准品、抗体、底物等组分按说明书要求分装保存,避免反复冻融?。
本说明书仅用于科研用途,不适用于临床诊断。操作前请仔细阅读完整说明书,并遵守实验室安全规范。
注:供科研使用,以上资料供参考。
人谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)ELISA试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。