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小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA检测试剂盒技术说明书
BS-9437 小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒
一、产品概述
本试剂盒采用双抗体夹心法原理，专用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清液中脂多糖结合蛋白(LBP)的浓度?。LBP作为急性期蛋白，在炎症反应中具有双重调控作用，其检测对研究免疫防御机制及病理过程具有重要意义?。
二、实验原理
捕获抗体包被?：抗小鼠LBP单抗体预包被于微孔板形成固相载体?。
抗原-抗体复合物形成?：样本中LBP与捕获抗体结合，加入生物素标记的检测抗体形成"三明治"结构?。
信号放大?：加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，与生物素结合实现信号放大?。
显色检测?：TMB底物显色后，通过450nm波长测定吸光度值，浓度与OD值呈正相关?。
三、试剂盒组分
| 组分 | 规格(96T) | 保存条件 |
| 预包被酶标板 | 8×12条 | 2-8℃ |
| 标准品 | 6浓度梯度 | -20℃ |
| 生物素标记抗体 | 120μL | -20℃ |
| 酶标复合物 | 12mL | 2-8℃ |
| TMB显色液 | A/B液各6mL | 2-8℃避光 |
| 终止液 | 12mL | 室温 |
| 浓缩洗涤液 | 60mL | 室温 |
四、样本处理
血清/血浆?：
血清：室温静置30min，2000×g离心15min，避免溶血?。
血浆：EDTA抗凝，3000×g离心20min，去除血小板。
组织样本?：
称取100mg组织，加入1mL PBS匀浆，反复冻融3次裂解细胞?。
12000×g离心10min取上清。
细胞上清?：
离心去除细胞碎片，上清液直接检测或冻存?。
保存条件?：
短期：2-8℃(≤48h)
长期：-20℃(≤1月)或-80℃(≤3月)，避免反复冻融?。
五、操作流程
试剂准备?：
浓缩洗涤液按1:20稀释(示例：1mL浓缩液+19mL蒸馏水)?。
标准品梯度稀释：取6支EP管，依次加入标准品稀释液200μL，倍比稀释?。
加样反应?：
每孔加入样本/标准品50μL，空白孔不加。
37℃孵育60min，洗涤5次(每次静置1min)。
检测步骤?：
加入生物素标记抗体100μL，37℃孵育30min。
加入酶标复合物100μL，37℃避光孵育20min。
加入TMB底物100μL，避光显色15min。
加入终止液50μL终止反应。
读数?：
450nm波长测定OD值，参考630nm校正值?。
六、结果分析
标准曲线?：以标准品浓度对数为横轴，OD值为纵轴绘制四参数拟合曲线?。
样本计算?：根据标准曲线线性方程计算样本浓度，乘以稀释倍数?。
检测范围?：0.156-10ng/mL(实际以说明书为准)?。
灵敏度?：低检测限≤0.078ng/mL?。
七、注意事项
样本处理?：
避免使用溶血、高血脂样本?。
组织样本需去除污渍?。
操作规范?：
加样时避免触及孔壁，保持枪头垂直?。
洗涤需净，残留液体会导致假阳性。
试剂保存?：
TMB显色液需避光保存，现配现用。
酶标板拆封后需密封防潮?。
质量控制?：
建议设置复孔检测，CV值应<15%?。
标准曲线R2值需≥0.99?。
八、常见问题处理
| 现象 | 可能原因 | 解决方案 |
| 阴性对照OD值偏高 | 洗涤不净/样本污染 | 增加洗涤次数/更换样本? |
| 标准曲线线性差 | 标准品稀释错误 | 重新配制标准品? |
| 重复性差 | 加样不均/孵育时间不一致 | 使用多道移液器/同步计时? |
| 显色过快/过慢 | 室温波动/底物失效 | 控制环境温度/更换底物 |
九、安全声明
本试剂含叠氮钠(NaN?)，避免接触皮肤或吸入?。
终止液含强酸，操作时佩戴防护手套?。
注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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