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　　小鼠真核细胞起始因子2α(eIF2α)ELISA检测试剂盒技术说明书

　　BS-9439小鼠真核细胞起始因子2α(eIF2α)ELISA试剂盒

　　一、产品概述

　　本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)技术，专用于定量检测小鼠血清、血浆及组织匀浆样本中的真核细胞起始因子2α(eIF2α)蛋白浓度。eIF2α是真核生物翻译起始复合物的核心调控因子，其磷酸化状态直接影响细胞应激反应与蛋白质合成平衡。本试剂盒适用于基础研究，如神经退行性疾病、肿瘤机制及代谢紊乱等领域的分子生物学实验。

　　二、检测原理

　　包被阶段?：特异性抗eIF2α抗体预包被于微孔板，捕获样本中的目标蛋白?。

　　结合阶段?：加入待测样本(如细胞裂解液或血清)，eIF2α与固相抗体结合形成复合物。

　　检测阶段?：加入酶标二抗，与eIF2α的另一表位结合，形成“抗体-抗原-抗体"夹心结构。

　　显色阶段?：通过底物(TMB)显色反应，测定吸光度值(OD值)，计算eIF2α浓度?。

　　三、试剂盒组分

　　预包被酶标板?：96孔板(8孔×12条)，含抗eIF2α抗体。

　　标准品?：冻干eIF2α蛋白，用于绘制标准曲线。

　　检测抗体?：生物素标记的二抗浓缩液。

　　酶结合物?：HRP标记链霉亲和素浓缩液。

　　样本稀释液?：适用于血清、血浆及组织匀浆的稀释。

　　洗涤液?：20×浓缩缓冲液，需稀释后使用。

　　显色底物?：TMB溶液，避光保存。

　　终止液?：2M硫酸溶液，终止显色反应。

　　四、样本准备

　　血清样本?：全血室温凝结30分钟，1000×g离心15分钟，取上清液。避免反复冻融。

　　血浆样本?：使用EDTA或肝素抗凝，离心后取上清。溶血样本可能影响结果。

　　组织匀浆?：称取组织块，加入裂解缓冲液匀浆，离心取上清。

　　细胞上清?：500×g离心5分钟，去除细胞碎片。

　　五、实验步骤

　　试剂准备?：将20×洗涤液稀释为1×工作液，标准品用样本稀释液复溶。

　　加样?：每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育1小时。

　　洗涤?：用洗涤液洗板3次，拍干。

　　检测抗体?：每孔加入100μL生物素标记二抗，37℃孵育1小时。

　　酶结合物?：每孔加入100μL HRP标记链霉亲和素，37℃孵育30分钟。

　　显色与终止?：加入100μL TMB底物，避光孵育15-20分钟;加入50μL终止液。

　　读数?：立即用酶标仪测定450nm波长吸光度值。

　　六、注意事项

　　避免交叉污染?：使用一次性枪头，不同样本分装处理。

　　温度控制?：显色阶段需避光，终止液有腐蚀性，操作时佩戴防护装备。

　　试剂保存?：未开启试剂盒可于2-8℃保存6个月;开启后组分需7天内用完。

　　数据分析?：推荐使用四参数拟合软件(如ELISACalc)绘制标准曲线。

　　七、技术参数

　　灵敏度?：可检测低至0.5 pg/mL的eIF2α蛋白。

　　检测范围?：31.25-2000 pg/mL(参考标准曲线)。

　　重复性?：批内与批间变异系数(CV)通常低于10%。

　　本试剂盒仅用于科研实验，不适用于临床诊断。操作前请充分阅读说明书，并遵循实验室安全规范。

　　注：本试剂盒仅供科研使用，不用于临床诊断。具体操作请以实际试剂盒说明书为准。

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