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　　微生物艰难梭菌毒素A(TCD-A)ELISA试剂盒技术使用说明书

　　BS-5181 微生物艰难梭菌毒素A(TCD-A)ELISA试剂盒

　　实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法检测样本中TCD-A浓度，通过预包被的抗TCD-A单抗捕获抗原，结合生物素标记的二抗及HRP酶偶联物，经TMB底物显色后，在450nm波长下测定吸光度，浓度与OD值呈正相关。

　　操作流程

　　样本处理

　　粪便样本：取0.2g粪便加入0.5ml稀释液，混匀后离心(2000rpm，10分钟)，取上清检测。

　　细胞培养上清：直接检测或稀释后使用，避免反复冻融。

　　试剂准备

　　洗涤液：20倍浓缩液用蒸馏水稀释至1倍。

　　标准品：4000pg/ml母液按梯度稀释(2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0 pg/ml) 。

　　检测步骤

　　加样：标准品/样本(50μl/孔)与检测抗体温育1小时。

　　显色：TMB底物避光反应15分钟，2M硫酸终止。

　　读数：酶标仪450nm波长测定，标准曲线计算浓度。

　　关键注意事项

　　样本要求：粪便样本需新鲜采集，避免溶血或污染;细胞上清需离心去除颗粒物。

　　试剂稳定性：未拆板条2-8℃保存，标准品溶解后需分装冻存。

　　质量控制：建议设置复孔，回收率应达80-120%。

　　安全防护：处理粪便样本需按生物安全规范操作。

　　数据分析

　　标准曲线需满足R2≥0.99，典型灵敏度为7pg/ml，检测范围31.25-2000pg/ml

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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