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大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒实验使用说明书
BS-3008 大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒
以下是?大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒?的实验使用说明书综合整理：
一、实验原理?
采用?双抗体夹心法?或?固相夹心法?ELISA技术。通过包被抗体捕获样本中的TNF-β，再与酶标抗体形成复合物，经TMB显色后，颜色深浅与TNF-β浓度成正比。
二、试剂盒组成?
核心组分?：
预包被微孔板(96孔)
标准品(浓度梯度：15.6~1000 pg/mL，冻干品需复溶)
酶标抗体(HRP标记)
显色底物(TMB A/B)
终止液(2N H?SO?)
浓缩洗涤液(20×~30×)
需自备器材?：
酶标仪(450nm)、移液器(10~1000μL)
37℃恒温箱、离心机(2000~5000×g)
三、样本处理?
血清/血浆?：全血室温静置2小时后离心(1000×g，20分钟)，避免溶血或脂血。
组织匀浆?：按1:9(重量:体积)加入PBS匀浆，离心取上清。
保存?：短期存于4℃，长期需分装冻存于-20℃(避免反复冻融)。
四、操作步骤?
试剂准备?：
复温：所有试剂室温平衡30分钟。
稀释洗涤液(如20×→1×)。
标准品稀释?：
按说明书梯度稀释(如1000→500→250 pg/mL)。
加样与温育?：
加标准品/样本(100μL/孔)，37℃孵育90分钟。
洗涤3次(每孔加洗涤液静置1分钟后甩干)。
显色与检测?：
加TMB底物(90μL/孔)，避光反应15分钟→终止液(50μL/孔)。
酶标仪读取OD450nm值。
五、注意事项?
关键控制点?：
移液精度误差≤2%，避免气泡干扰。
显色液需避光现配，终止液倾倒缓慢防溅。
数据计算?：
以标准曲线拟合样本浓度(推荐四参数逻辑曲线)。
保存条件?：
未开封试剂盒：2-8℃保存6个月;开封后板条需密封防潮。
六、常见问题?
显色异常?：检查底物是否过期或污染。
高背景值?：洗涤不净或样本浓度过高(需稀释)。
注：以上资料仅供参考，如需具体品牌试剂盒的完整说明，可咨询技术老师或品牌供应商的详细文档。
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