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　　以下是植物醇溶谷蛋白(ASP)ELISA试剂盒的实验使用说明书，综合整理自相关技术资料：

　　BS-4955  植物醇溶谷蛋白(ASP)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。预先包被ASP捕获抗体的微孔板中依次加入标本、标准品和HRP标记检测抗体，经温育洗涤后，通过TMB显色反应(蓝色→黄色)实现定量检测，颜色深浅与ASP浓度呈正相关?。

　　二、样本处理要求

　　血清?

　　采集后室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟取上清

　　避免反复冻融，建议-20℃/-80℃保存?

　　血浆?

　　需使用EDTA/肝素抗凝剂，采集后30分钟内2-8℃ 1000×g离心15分钟?

　　组织匀浆?

　　建议使用预冷PBS(pH7.4)制备匀浆液?

　　三、操作步骤

　　将试剂平衡至室温(约30分钟)?

　　分别加入标准品、待测样本至对应微孔(建议做复孔)?

　　加入HRP标记抗体，37℃温育60分钟?

　　洗板5次(每次静置30秒弃液)?

　　每孔加入TMB显色液，避光反应15分钟?

　　加入终止液，15分钟内450nm波长测OD值?

　　四、注意事项

　　保存条件?：试剂盒需2-8℃避光保存，有效期6个月?

　　安全规范?：

　　禁止用嘴吸取试剂?

　　避免接触终止液/TMB，若接触立即冲洗?

　　质量控制?：

　　板内变异系数<10%，板间<15%?

　　空白OD值应≤0.08?

　　五、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度?。检测范围通常为0.25-8ppm?。

　　(注：具体操作请以试剂盒内附说明书为准，本说明综合了不同厂家的通用流程?)

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