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　　ELISA样本稀释操作指南：原理、方法与优化技巧

　　ELISA样本稀释操作指南

　　一、稀释原理

　　ELISA样本稀释的核心是通过精确的浓度梯度调整，使待测样本的OD值落在标准曲线线性范围内(通常为最高标准品OD值的50%-80%)?。稀释不足会导致信号饱和，过度稀释则可能降低检测灵敏度?。关键是通过预实验确定样本基质效应，选择适当的稀释液(如1×PBS或专用稀释缓冲液)以保持抗原-抗体结合活性?。

　　二、标准操作方法

　　标准品稀释?

　　采用倍比稀释法：原液按1:2、1:4等比例逐级稀释，推荐浓度梯度覆盖检测范围(如1000 pg/mL至15.6 pg/mL)?。

　　使用校准移液器，每步混匀后取150-300μL转移至下一管，避免气泡残留?。

　　样本稀释?

　　血清/血浆样本需用稀释缓冲液至少稀释2倍，细胞上清建议1:1稀释?。

　　高浓度样本需预实验确定最佳稀释倍数，确保OD值接近标准曲线中段?。

　　三、优化技巧

　　稀释液选择?：含0.05% Tween-20的PBS可减少非特异性结合，脱脂牛奶(5%)适合封闭高背景样本?。

　　避免误差?：使用带滤芯枪头防止交叉污染，手工洗板时拍干孔内液体?。

　　质控验证?：每板需含空白孔和阴性对照，标准曲线R2值需>0.99?。

　　四、常见问题处理

　　假阳性/阴性?：检查样本是否溶血或脂血，避免反复冻融?。

　　信号异常?：确认酶标试剂现配现用，显色时间控制在15-30分钟?。

　　通过规范操作和优化策略，可显著提升ELISA检测的准确性和重复性?。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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