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如何选择ELISA试剂盒?关键检测方法解析
选择ELISA试剂盒需首先明确检测目标(大分子蛋白或小分子抗原)及样本类型,再根据检测原理匹配方法:
1. ?双抗体夹心法?
适用于二价及以上大分子抗原(如细胞因子、抗体),通过捕获抗体和检测抗体形成“夹心"结构,特异性高且灵敏度强?。但需确??乖喔霰砦?,且需优化抗体对以避免交叉反应?。
2. ?竞争法?
针对小分子抗原,通过待测物与酶标抗原/抗体竞争结合位点,显色信号与待测物浓度成反比?。优势在于可检测不纯样本,但敏感性和专一性较低?。
3. ?间接法?
通过酶标二抗放大信号,灵敏度高且经济灵活,常用于抗体效价检测?。但需注意二抗可能与非目标蛋白结合导致背景升高?。
4. ?直接法?
步骤简单,适合快速检测,但灵敏度低且需标记每种一抗,成本较高?。
选择建议
大分子蛋白?:优先双抗体夹心法?;
小分子抗原?:选择竞争法?;
样本复杂度?:高背景样本需优化封闭和洗涤步骤?;
灵敏度要求?:低丰度目标需高敏试剂盒(pg/mL级)?。
注意事项
验证试剂盒的批间精密度(CV<15%)和加标回收率(80%~120%);
特殊样本(如高脂血清)需预处理或选择适配试剂盒?。
注:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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