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　　ELISA实验原理

　　ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种基于抗原-抗体特异性结合的免疫检测技术，通过酶催化底物显色实现定性或定量分析?。其核心原理包括：

　　固相包被?：抗原或抗体通过物理吸附固定在微孔板表面?。

　　免疫反应?：待测样本与包被物结合，形成抗原-抗体复合物?。

　　信号放大?：酶标记的二抗或底物催化显色，通过酶标仪读取吸光度值?。

　　主要ELISA类型及适用场景

　　类型? ?          原理特点?                                   典型应用?

　　直接ELISA?  抗原直接包被，酶标一抗检测    病毒颗粒、纯化蛋白定量?

　　间接ELISA?  酶标二抗放大信号，灵敏度高    抗体检测(如HIV、新冠IgG/IgM)?

　　夹心ELISA?  双抗体夹心结构，特异性强       胞因子(IL-6)、肿瘤标志物(CEA)?

　　竞争ELISA?  标记抗原与样本抗原竞争结合抗体 小分子检测(激素、药物)?

　　关键试剂与仪器

　　试剂?：

　　包被缓冲液?(如碳酸盐缓冲液)?

　　酶标抗体?(HRP或AP标记)?

　　显色底物?(TMB或OPD)?

　　终止液?(如硫酸)?

　　仪器?：

　　酶标仪(检测吸光度)?

　　移液器(精确加样)?

　　洗板机(去除未结合物)?

　　操作步骤(以夹心ELISA为例)

　　包被?：捕获抗体固定于微孔板，4℃过夜?。

　　封闭?：加入BSA或脱脂牛奶封闭非特异性位点?。

　　孵育?：加入样本和检测抗体，37℃孵育1小时?。

　　显色?：加入TMB底物，避光反应15分钟?。

　　终止?：加入终止液，酶标仪读取450nm吸光度?。

　　注意事项

　　样本处理?：避免反复冻融，离心去除颗粒物?。

　　洗涤?：每次孵育后需洗涤，减少背景信号?。

　　标准曲线?：需设置梯度浓度标准品，确保线性范围?。

　　注：以上资料仅供参考，具体产品信息请咨询技术老师或品牌供应商。

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