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　　ELISA双抗体夹心法有哪些常见问题?

　　以下是ELISA双抗体夹心法实验中常见问题的系统分析及解决方案，本生技术小编结合多来源信息整理：

　　一、样本相关异常?

　　假阳性/高背景?

　　原因?：血液溶血或纤维蛋白未清除，血红蛋白干扰显色?

　　对策?：3000rpm离心15min，取上清检测，避免溶血样本?

　　稀释线性异常?

　　现象?：样本孔OD值超出标准曲线范围(>2.0或<0.1)?

　　调整?：按10倍梯度稀释重测，确保OD值在0.1-1.5区间?

　　二、操作技术问题?

　　洗涤不充分?

　　表现?：整板均匀显色(花板)或复孔CV>20%?

　　优化?：洗板5次，每次拍板后更换吸水纸，避免交叉污染?

　　孵育条件失控?

　　温度?：超过37℃导致非特异性结合增加(建议恒温箱校准)?

　　时间?：超过说明书建议时间(通?？乖跤?小时)?

　　三、试剂与设备问题?

　　抗体配对不当?

　　影响?：钩状效应(高浓度样本假阴性)?

　　验证?：通过棋盘滴定确定最佳抗体浓度比?

　　底物失效?

　　判断?：阳性对照孔显色浅或无色?

　　处理?：现配现用TMB，避光保存，避免金属离子污染?

　　四、数据分析异常?

　　标准曲线拟合不佳?

　　指标?：R2<0.99或低浓度点偏离?

　　措施?：检查标准品溶解是否充分，复孔重复性?

　　灵敏度不足?

　　标准?：最高浓度孔OD值应>1.0?

　　提升?：延长封闭时间(2小时)或更换高亲和力抗体?

　　注：以上资料仅供参考，如需进一步了解产品详情，可参考品牌供应商或技术老师。

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